三分類血液分析儀使用的試劑一般分為稀釋劑、溶血劑和清洗劑三種,優(yōu)良的試劑質(zhì)量是保證儀器的正常運行、日常維護(hù)及獲得準(zhǔn)確測試結(jié)果的重要條件。
目前,國內(nèi)使用的血液分析儀基本上是進(jìn)口產(chǎn)品,且絕大部分而采用阻抗法。阻抗法計數(shù)細(xì)胞的原理如下:首先將細(xì)胞在測試過程中產(chǎn)生的脈沖大小與儀器設(shè)定的閾值進(jìn)行比較,再根據(jù)處于閾值范圍的脈沖的多少來判定細(xì)胞的數(shù)量,進(jìn)而得出數(shù)據(jù)。脈沖的大小除與細(xì)胞的大?。ㄈ绨准?xì)胞中粒細(xì)胞體積最大,淋巴細(xì)胞最?。┯嘘P(guān)外,還與溶血劑的種類,濃度、加入量、溶血時間及稀釋劑的滲透壓、離子強(qiáng)度、電導(dǎo)率、pH值、儀器出廠時固定的閾電壓、孔電流和脈沖的增益等有關(guān)。
絕大多數(shù)溶血劑的主要組成成分是一類強(qiáng)有力的表面活性劑物質(zhì),不同類別的表面活性劑對白細(xì)胞形態(tài)、大小影響不同,如十六烷基三甲基溴化銨能使白細(xì)胞失水、細(xì)胞膜皺縮、胞體縮??;而十四烷基三甲基溴化銨能使白細(xì)胞體積增大。反映在細(xì)胞計數(shù)時脈沖的大小變化,前者作用后的白細(xì)胞的脈沖小,后者作用后的白細(xì)胞的脈沖大。
同一種溶血劑,濃度高低不同,對白細(xì)胞體積影響也不同,通常是隨著溶血劑濃度增高,白細(xì)胞的體積逐漸縮小,測量時的脈沖也逐漸變。
隨著溶血劑的用量增加或溶血時間延長,白細(xì)胞的體積也逐漸縮小,測量時的脈沖也變小。這是因為在這兩種情況下,白細(xì)胞膜破裂,皺縮在細(xì)胞核周圍的胞漿顆粒及胞膜脫落,而僅剩細(xì)胞核??梢姡苎獎┑牡谝蛔饔檬侨芙饧t細(xì)胞,對白細(xì)胞進(jìn)行適當(dāng)修飾,進(jìn)行白細(xì)胞計數(shù)分類。因此,欲獲得準(zhǔn)確的白細(xì)胞計數(shù)及分類結(jié)果,應(yīng)使用配套溶血劑或與其性能相同的自制溶血劑。
溶血劑的另一個作用是溶解紅細(xì)胞,釋放出血紅蛋白。進(jìn)行血紅蛋白的測定。不同溶血劑的溶解紅細(xì)胞程度及與Hb形成的Hb衍生物,能否用于準(zhǔn)確進(jìn)行Hb測定,是衡量溶血劑優(yōu)劣的另一標(biāo)準(zhǔn)。
稀釋劑的組成相對簡單,一般是由具有酸堿緩沖作用、適當(dāng)?shù)碾x子強(qiáng)度和電導(dǎo)串的等滲溶液組成。稀釋劑只有與血漿相同的滲透壓,能在一定時間內(nèi)完整的保持血細(xì)胞原來的體積。而合適的電導(dǎo)率能保證獲得與細(xì)胞體積相應(yīng)的脈沖大?。♂寗┑呐浞匠煞植煌?,盡管能將其滲透壓調(diào)整到與配套稀釋劑一致,但其電導(dǎo)率也不可能相同,測試所獲得的細(xì)胞脈沖大小也不會相同。
稀釋劑的配方成分不同,盡管也能將電導(dǎo)率調(diào)整到與配套稀釋劑一致,但其離子強(qiáng)度,滲透壓也不可能一致,同樣影響測試結(jié)果。這些變化不僅影響MCV、PDW、MPV,還影響WBC計數(shù)及分類結(jié)果,應(yīng)使用配套稀釋劑或與其性能相同的自制稀釋液。不同緩沖介質(zhì)也可能產(chǎn)生不同的分類結(jié)果。