50年代初期,美國(guó)庫(kù)爾特先生研制了電阻抗法血細(xì)胞分析儀,開創(chuàng)了血細(xì)胞分析的新紀(jì)元。隨著基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)的發(fā)展,高科學(xué)技術(shù)的應(yīng)用,特別是計(jì)算機(jī)技術(shù)的引用,血細(xì)胞分析儀的測(cè)量水平不斷提高,測(cè)量參數(shù)不斷增加,不但提高了醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的水平,還為臨床提供更多有用的實(shí)驗(yàn)指標(biāo),對(duì)于某些疾病的診斷與治療具有重要的臨床價(jià)值。
根據(jù)各項(xiàng)參數(shù)的血液分析檢測(cè)原理不同,血細(xì)胞分析儀對(duì)紅細(xì)胞的檢測(cè)大致分為三個(gè)部分。
1.紅細(xì)胞數(shù)(RBC)和紅細(xì)胞比積(Hct):迄今,絕大多數(shù)血液分析儀使用電阻抗法進(jìn)行紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和紅細(xì)胞比積測(cè)定,其原理同白細(xì)胞檢測(cè)一樣。紅細(xì)胞通過(guò)小孔時(shí),形成相應(yīng)大小的脈沖,脈沖的多少即紅細(xì)胞的數(shù)目,脈沖的高度代表單個(gè)脈沖細(xì)胞的體積。脈沖高度疊加,經(jīng)換算即可得紅細(xì)胞的比積。有的儀器先以單個(gè)細(xì)胞高度計(jì)算紅細(xì)胞平均體積(MCV)。再乘以紅細(xì)胞數(shù)得出紅細(xì)胞比積。儀器根據(jù)所測(cè)單個(gè)細(xì)胞體積及相同體積細(xì)胞占總體的比例,可打印出紅細(xì)胞體積分布直方圖。稀釋的血液進(jìn)入紅細(xì)胞檢測(cè)通道時(shí),其中含有白細(xì)胞,紅細(xì)胞檢測(cè)的各項(xiàng)參數(shù)均含有白細(xì)胞因素。由于正常血液有形成分中白細(xì)胞比例很少(紅細(xì)胞:白細(xì)胞約為750:1),故白細(xì)胞因素可忽略不計(jì)。在某些病理情況下,如白血病,白細(xì)胞數(shù)明顯增加而又伴嚴(yán)重貧血時(shí),均可使所得各項(xiàng)參數(shù)產(chǎn)生明顯誤差。
2.血紅蛋白(Hb)含量測(cè)定:任何類型、檔次的血細(xì)胞分析儀,血紅蛋白測(cè)定原理都是相同的。被稀釋的血液加入溶血?jiǎng)┖?,紅細(xì)胞溶解,釋放血紅蛋白,后者與溶血?jiǎng)┲杏嘘P(guān)成分結(jié)合形成血紅蛋白衍生物.進(jìn)入血紅蛋白測(cè)試系統(tǒng),在特定波長(zhǎng)(一般在530一550nm)下比色,吸光度的變化與液體中血紅蛋白含量成正比,儀器便可顯示其濃度。不同系列血細(xì)胞分析儀配套溶血?jiǎng)┡浞讲煌?,形成的血紅蛋白衍生物亦不同,吸收光譜各異,但最大吸收均接近540nm。這是因?yàn)閲?guó)際血液標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(ICSH)推薦的氰化高鐵(HiCN)法,HiCN最大吸收在540nm。校正儀器必須以HiCN值為標(biāo)準(zhǔn)。大多數(shù)系列血細(xì)胞分析儀溶血?jiǎng)﹥?nèi)均含有氰化鉀,與血紅蛋白作用后形成氰化血紅蛋白(注意不是氰化高鐵血紅蛋白),其特點(diǎn)是顯色穩(wěn)定,最大吸收接近540nm,但吸收光譜與HiCN有明顯不同。此點(diǎn)在儀器校正時(shí)應(yīng)十分注意。
為了減少溶血?jiǎng)┑亩拘?,避免含氰血紅蛋白衍生物檢測(cè)后的污物處理,近年來(lái)有些血細(xì)胞分析儀使用非氰化溶血?jiǎng)?。?shí)驗(yàn)證明,形成的衍生物與HiCN吸收光譜相似,實(shí)驗(yàn)結(jié)果的精確性、準(zhǔn)確性達(dá)到含有氰化物溶血?jiǎng)┩瑯铀?。既保證了實(shí)驗(yàn)質(zhì)量,又避免了試劑時(shí)分析人員的毒性和環(huán)境污染。
3.各項(xiàng)紅細(xì)胞指數(shù)檢測(cè)原理:同手工法一樣,紅細(xì)胞平均體積(MCV)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白的含量(MCH)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度(MCHC)、紅細(xì)胞體積分布寬度(RDW)。均根據(jù)儀器檢測(cè)的紅細(xì)胞數(shù)、紅細(xì)胞比積和血紅蛋白含量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),經(jīng)儀器內(nèi)存程序換算出來(lái)的。
RDW由血細(xì)胞分析儀測(cè)量獲得是反映周圍血紅細(xì)胞體積異質(zhì)性的參數(shù)。當(dāng)紅細(xì)胞通過(guò)小孔的一瞬間,計(jì)數(shù)電路得到一個(gè)相應(yīng)大小的脈沖,不同大小的詠沖信號(hào)分別貯存在儀器內(nèi)裝計(jì)算機(jī)的不同通道,計(jì)算出相應(yīng)的體積及細(xì)胞數(shù).統(tǒng)計(jì)處理而得RDW。由于RDW來(lái)自十幾秒內(nèi)近萬(wàn)個(gè)紅細(xì)胞的檢測(cè)數(shù)據(jù),不但可以克服測(cè)量紅細(xì)胞直徑時(shí)人為制片條件和主觀因素的影響,還比P-J曲線更能直接、客觀、及時(shí)地反映紅細(xì)胞大小不等的程度,對(duì)貧血的診斷有重要意義。